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益生菌菌种含菌量的检测方法

2017-12-28 16:34:53点击:

 
   益生菌个体一般都很小,只有几微米或零点几微米是一根头发丝的八十分之一,只有借助显微镜才能看到。益生菌的产品都标有含量,那么这么小的细菌怎么数的呢?我们看到益生菌产品中都标有某某菌含有多少多少CFU。
 CFU是什么?
   首先介绍怎么数:一般产品上标有每g,每片,每ml含有多少菌?国家标准中的益生菌使用推荐量为每次1000万,那么怎么看这产品中有没有产品标记的含量,有没有1000万呢?科研上用稀释的方法,把你想检测的样品稀释100万倍,再来数有没有10个,这样就很好数了。说的轻巧,稀释100万倍,太夸张了吧!其实方法也简单,用的是倍比稀释的方法,把1g,1ml样品放入9ml水中,就稀释了10倍,再在把稀释了10倍的液体,吸取1ml放入另一个9ml试管中就变成了100倍,就这样稀释7次就达到了100万了!就数一数稀释了100万倍的液体中有没有10个细菌就能看出你买的产品合不合格了。数量问题是解决了,可这么小我怎么观察啊,不是还是没法数?这时候就要用平板记数法:把稀释了100万稀释液是接种到琼脂培养基平皿上,经过一定温度和时间培养后,由于细胞受到固体培养基表面或深层的限制,繁殖的菌体常以母细胞为中心聚集在一起,形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细菌群体(像脸上出的小脓包),称为菌落(eolony)。 即你看到的记数单位CFU,用每个大的菌落来代表检测出的一个细菌,让看不到的东西能够看到并且容易数,这就是菌落记数的方法,并且也证明了菌是活的哦。 如下图:

 
 以下为专业知识:
   各种细菌,在一定条件下形成的菌落特征具有一定的稳定性和专一性,这是衡量菌种纯度,辨认和鉴定菌种的重要依据。菌落特征包括大小,形状(圆形、假根状、不规则状等),隆起形状(扩展、台状、低凸、凸面、乳头状等)边缘情况(整齐、波状、裂叶状、锯齿状等),表面状态(光滑、皱褶、颗粒状、龟裂状、同心环状等),表面光泽(闪光、金属光泽、无光泽等),质地(油脂状、膜状、粘、脆等),颜色,透明程度等。
 
   菌落特征,取决于组成菌落的细胞结构和生长行为。例如肺炎双球菌有荚膜,菌落表面光滑粘稠,为光滑型;无荚膜的菌株,菌落表面干燥皱褶,为粗糙型;蕈状芽孢杆菌等的细胞呈链状排列,菌落表面粗糙、卷曲,菌落边缘有毛状突起。扫描电子显微镜观察结果,也表明菌落特征与其中的细胞形状和排列密切有关。有的菌落有颜色,其色素有些是不溶性的,存在于细胞内;有的是可溶性的,扩散至培养基中。菌落形态大小也受邻近菌落影响。菌落靠得太近,由于营养物有限,有害代谢物的分泌与积累,生长受到抑制。因此,以划线法分离菌种时,相互靠近的菌落较小,分散的菌落较大。
 
   从上可知,细菌落形态是细胞表面状况、排列方式、代谢产物、好气性和运动性的反映;并受培养条件、尤其是培养基成分的影响;培养时间的长短也影响菌落应有特征的表现,观察时务必注意。一般细菌需要培养3-7天甚至10天观察,同时还应选择分布比较稀疏处的单个菌落观察。
 
   如果一个菌落是由一个细菌繁殖面来,则为纯培养。每种菌在一定条件下的菌落特征是一定的,在相同条件下菌落特征是改变,常标志着细菌生理性状发生了变异,如光滑型变成了粗糙型。但环境条件的改变也会引起菌落性状的改变,因此,在不同条件下,菌落特征所出现的微小差异不能误认为菌株发生了变异。
 
   在环境因素作用下,每一个细菌的生活能力各不相同,会影响其在该条件下形成菌落的能力;又如,吸附于微小颗粒上的2个以上菌体或粘连在一起的菌团可能共同形成一个菌落等等。致使形成的菌落数远远低于实际的活菌数。
   在平皿培养上形成的菌落往往有表面菌落、深层菌落和底层菌落三种情况。前面介绍的菌落特征,主要指表面菌落。有的细菌,由于培养基凝固剂的种类、用量以及接种方法不同可表现出不同的群体特征。
 
   若以穿刺法接种于半固体琼脂试管培养基中,不仅可观察群体特征,还可借以判断该菌是否具运动性。若以明胶代替琼脂,同样以穿刺法接种,如果该菌含明酶则能水解明胶,并开成形态的液化区。此法也常用于细菌的鉴定。也可用固体琼脂试管斜面,以划线法接种,培养3-5天后观察群体生长特征。在液体培养基中,经1-3天培养,细菌生长的结果,使培养基混浊,或在表面形成菌环、菌膜或菌醭,或产生絮状沉淀。有的产生气泡以至色素等。